Bevezetés
Korábbi publikációink alapján a lizofoszfatidsav (LPA) jelentős hatással van az értónusra.
Egér
mellkasi aortában az LPA ép endotélium jelenlétében vazorelaxációt, míg károsodott
endotélium
esetén vazokonstrikciót okoz, mely utóbbit tromboxán A2 felszabadulás közvetíti. Az
LPA értónus
hatásai eredményeink szerint az LPA1 receptorok aktivációján keresztül valósulnak
meg. Jelen
vizsgálatban arra voltunk kíváncsiak, milyen intracelluláris jelátviteli utak közvetítik
az LPA
vazokonstriktor hatását az aorta simaizomsejtekben.
Anyag és módszer
Felnőtt hím egerek mellkasi aortáját transzkardiális perfúziót követően izoláltuk.
Az aortát
megtisztítottuk, majd a kísérletek jelentős részében az adventitia réteget mechanikusan
elválasztottuk a media rétegtől, az intimát pedig fonallal irtottuk. Az így kapott
szövetek egy részéből
adventitia illetve simaizom primer sejtkultúrát hoztunk létre, egy részében pedig
qPCR mérést
végeztünk. További szétválasztott adventitia, media, valamint épen hagyott aorta mintákban
izometriás feszülést mértünk miográf módszerrel, intracelluláris kalcium mérést végeztünk
ratiometriás módszerrel, illetve tromboxán felszabadulást mértünk ELISA segítségével.
Eredmények
Mivel elsődlegesen arra voltunk kíváncsiak, milyen jelátviteli utakat aktivál az LPA
a simaizom
sejtekben, így kalcium-mérést végeztünk izolált aorta simaizom sejteken, illetve adventitia
irtott
simaizom gyűrűkben erőméréssel egybekötve. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy az
LPA nem
tud sem kalcium-szignált, sem kontrakciót kiváltani, miközben a simaizomsejtek válaszkészsége
ATP-re, illetve a simaizom gyűrűk tromboxán receptor agonista U46619-re megtartott
maradt. Mivel
az aorta rétegei közül az adventitia mutatta a legnagyobb Lpar1 expressziót, ezért
megvizsgáltuk,
az adventitia réteg hiánya okozta-e az LPA hatásának elmaradását. Mind adventitia
sejtkultúrán,
mind adventitia gyűrűkön az LPA kezelés kalcium-szignált váltott ki, valamint adventitia
jelenlétében
az érgyűrűk LPA hatására mutattak kalcium-jelet és kontraháltak. A simaizom gyűrűkben
LPA
kezelés hatására nem jött létre tromboxán A2 felszabadulás, míg adventitia preparátumban
igen.
Következtetés
Az LPA vazokonstriktor hatását az adventita LPA1 receptorok aktivációja és az onnan
felszabaduló
tromboxán A2 közvetíti, miközben az LPA közvetlen hatása az aorta simaizomrétegben
elhanyagolható. Az LPA okozta érösszehúzódás eredményeink szerint egy adventitiából
induló, ún.
„outside-in” parakrin hatás, aminek szerepe lehet az adventitia aktivációjával járó
állapotokban.
