Az antitestek olyan fehérjék, amiket az immunrendszer a szervezetbe jutó idegen anyagok
felismerése és
megsemmisítése érdekében termel. A szerkezetükben levő variábilis hurokrégiók felelősek
a célmolekulákhoz
való szelektív kötődésért. A hagyományos antitestekkel ellentétben az egydoménes antitestek
(sdAb) egyetlen
nehézláncból álló fehérjék, ezért rekombináns fehérjeként termeltethetők baktériumban.
Ebből kifolyólag az
sdAb-k laboratóriumban könnyen, gazdaságosan állíthatók elő, valamint génsebészeti
módszerekkel könnyen
módosíthatók, így különféle tulajdonságokkal ruházhatók fel, aminek köszönhetően kiválóan
alkalmazhatók akár
diagnosztikai, akár terápiás eljárások során.
Munkánk során két vírustípusra (HIV, Hepatitis C) specifikus, összesen háromféle egydoménes
antitest
előállítását tűztük ki célul. A proteineket kódoló DNS-eket génsebészeti eszközökkel
olyan fehérje expressziós
vektorokba építettük, melyek azok valamelyik végére oligohisztidin peptidet fuzionáltak.
Ez a peptid a fehérje
tisztítását és a későbbi alkalmazásokban az immobilizálását is lehetővé teszi. Az
anti-HIV és anti-HCV fehérjék
szerkezetét egy vagy két diszulfidhíd stabilizálja, de ezek a baktériumok reduktív
citoplazmájában általában nem
képesek megfelelően kialakulni, ami gyakran a protein aggregációjához és így funkcióvesztéshez
vezet. A
fehérjék termeltetését emiatt egy olyan módosított E. coli törzsben végeztük, mely
kevésbé reduktív közegben
még egy a diszulfidhidak megfelelő kialakulását segítő enzimet is ko-expresszál. Az
expressziót ezen kívül sok
tényező befolyásolja, például a rendszer oxigén ellátottsága, a hőmérséklet, az indukció
ideje, valamint az
induktor mennyisége, ezért célul tűztük ki megtalálni azokat a paramétereket, amelyek
alkalmazásával a
legnagyobb mennyiségben lehet a vírusokra specifikus egydoménes antitesteket oldható
formában előállítani. A
fehérjéket immobilizált fémkelát affinitási kromatográfiás módszer (IMAC) alapján,
Ni-affinitás kromatográfiás
oszlopon FPLC-vel tisztítottuk.
Ezen sdAb-k szilárd hordozóra rögzítve különösen hasznosak lehetnek a HIV és HCV vírusok
szelektív
kifogására, beleértve a diagnosztikai és terápiás eljárásokat is.
