Bevezetés: Egy nógrádi családban három generáción át öröklődött egy fiúkban az első
életévekben fatális betegség, mely az érintett nőkben cataractával és halláscsökkenéssel
járt. A betegség nem felelt meg egy ismert kórképnek sem. Célunk a kóroki gén azonosítása
és a kórfolyamat megismerése volt. Módszerek: A felelős locust a családtagok haplotipizálásval
határoztuk meg. A nagyszülői generációban megjelenő kóroki, de novo mutációt két haploidentikus
(egy érintett és egy nem érintett) férfi családtagban az azonosított locus szekvenálásával.
Az azonosított mutáció patogenitásának és az érintett kórfolyamatnak a vizsgálatára
CRISPR/Cas9 rendszerrel hoztunk létre KO zebrahal modellt. Fluoreszcencia spektroszkópiával
vizsgáltuk a mutáció fehérje-interakcióra gyakorolt hatását eukarióta sejtvonalon
expresszált és maleimidekkel jelölt fehérjék révén. Az X-inaktiváció arányát qPCR
módszerrel, a telomer hosszát flow-FISH módszerrel, a18S és 28S rRNS pszeudouridilációjának
mértékét Northern blottal határoztuk meg. Eredmények: Összhangban a fiúk súlyos érintettségével,
az X kromoszóma hosszú karjának telomerikus végén (Xq28) azonosítottunk egy 5.1Mb
nagyságú locust. A vizsgált régióban egyetlen de novo mutációt azonosítottunk, mely
a betegséggel egyszerre jelent meg a családban (DKC1, c.616 G>A, p.Glu206Lys), és
szegregált a nagyszülői, csírasejt-mozaikosság miatt változóan érintett generációban
is. Az érintett aminosav extrém konzervált (Archeákban is), az átlagpopulációban a
szomszédos aminosavaknak sem ismert variánsa. A KO zebrahal modell reprodukálta a
humán fenotípust, melyet a humán vad mRNS menekített, a Glu206Lys mRNS nem. Egy súlyosan
érintett lányban az X-inaktiváció jelentős mértékben volt torzult a fibroblasztokban
(98:2). A diszkerin Glu206Lys variáns növelte az interakcióban lévő NOP10 fehérjével
való kötődést, és a diszkerin pszeudouridilációs katalitikus helyét érintette. Jóllehet
az érintett fiúkban a diszkerin mutációinak ismert következményét, telomer-rövidülést
is találtunk, a KO halakban a fenotípus már akkor kialakult, amikor a telomer hossza
még normális, a 18S rRNS pszeudouridilációja viszont már csökkent volt. Következtetés:
A diszkerin p.Glu206Lys mutációja a rRNS pszeudouridilációjának károsodását és egy
fiúkban letális, cataractával, halláskárosodással, nephrosis szindrómával és enteritisszel
járó betegséget okoz.
