Bevezetés: A szteroid rezisztens nefrózis szindróma leggyakrabban érintett kóroki
génje a podocint kódoló NPHS2. A podocin a podocyta lábnyúlványai között elhelyezkedő
résmembrán alkotásában vesz részt, ahol a nefrinhez, a résmembrán legfontosabb fehérjéjéhez
kötődik. Hipotézisünk szerint a podocin szerepet játszik a nefrin fehérjék közötti
távolság szabályozásában. Anyag és módszer: Két nefrin molekula távolságának meghatározásához
mRuby3 és YPet fluoreszcens fehérjékkel C-terminálisan, illetve mCherry és YPet fluoreszcens
fehérjékkel extracellulárisan jelölt nefrin molekulák között mértük a Förster típusú
rezonancia energiatranszfer (FRET) hatásfokát élő, tranziensen transzfektált HEK-293
sejteken. A podocin hatásának vizsgálatára a jelölt nefrin párokat jelöletlen podocin
variánsokkal koexpresszáltuk. A podocin szerepét patogén környezetben sóterheléssel
vizsgáltuk, amely során 25mM NaCl többletet tartalmazó DMEM-et adtunk egy nappal a
mérést megelőzően a transzfektált sejtekhez. A podocin konstrukciók lokalizációját
konfokális mikroszkóppal ellenőriztük. Az adatok analíziséhez normál eloszlás esetén
ANOVA, majd Tukey HSD tesztet, nem normál eloszlásnál Mann-Whitney U tesztet használtunk.
Eredmények: Hasonló eredményeket kaptunk az intra- és extracellulárisan jelölt nefrin
konstrukciókkal végzett vizsgálatok során. A vad és a benignus R229Q variáns podocin
jelenlétében a nefrin fehérjék között mérhető FRET megnő, míg az A284V, R138Q és R286Tfs*17
patogén mutánsok jelenlétében nem változik. Az extracellulárisan jelölt nefrin konstrukciókkal
végzett kísérletek során a V290M podocin mellett kismértékű FRET-növekedést találtunk,
amely összhangban van a V290M variáns okozta betegség klinikailag enyhe lefolyásával.
Többlet só a nefrin fehérjék közötti távolságot csak a podocin jelenlétében befolyásolta:
a FRET hatásfok nem nőtt podocin jelenlétében, vagyis a só gátolta a podocin összetartó
funkcióját. Következtetés: Kimutattuk, hogy a vad és benignus podocin variáns csökkenti
a szomszédos nefrin fehérjék közötti távolságot. A patogén mutánsok jelenlétében mért
FRET hatásfok korrelált a variánsok által okozott klinikai képpel. Többlet só csak
a podocin jelenlétében befolyásolja a nefrin fehérjék közötti távolságot. Mindezek
alapján a podocin fő funkciója a nefrin által alkotott glomeruláris pórus méretének
szabályozása. A patogén podocin variánsok ezt a funkciót nem képesek betölteni, amely
magyarázza a proteinuriát.
